大家好,乐天来为大家解答以下的问题，关于硅胶柱层析的操作方法及注意事项，硅胶柱层析这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、[编辑本段]硅胶柱层析原理 硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

2、[编辑本段]硅胶柱层析流动相 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统;极性较大的用甲醇：氯仿系统;极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸[编辑本段]硅胶柱层析惯用方法 1.称量。

3、200-300目硅胶，称30-70倍于上样量;如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

4、干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

5、 2.搅成匀浆。

6、加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

7、如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

8、如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

9、氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

10、如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

11、 3.装柱。

12、将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚(氯仿)，装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

13、随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。

14、 4.压实。

15、沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

16、柱床约被压缩至9/10体积。

17、无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

18、 5.上样。

19、干法湿法都可以。

20、海沙是没必要的。

21、上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

22、然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

23、 6.过柱和收集。

24、柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

25、太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

26、收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分;1-2g上样量，50g硅胶(200-300目)，20-50ml收一馏分。

27、 7.检测。

28、要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

29、 8.送谱。

30、收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。

31、如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。

32、可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。

33、 注意事项 1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化 2.将柱子必须装平整、均匀 3.考虑有限柱填料的吸附量 4.可考虑用剃度法分开并洗脱。

硅胶柱一般是正相还是反相

正相色谱是采用极性固定相(如带有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等)、非极性流动相(如正己烷等)的分离方法。这是一种根据分子的极性大小将其分开的液相色谱技术。

反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。

在硅胶基质的反相填料中，以键合有C18、C8、C2的球形多孔填料最为常见，用途最广。通过键合CN键，改变反相介质极性，就变成了正相色谱。